1、NP-40裂解液是一種比較溫和的細胞組織裂解液，可以用于常規的Western、IP和co-IP等實驗蛋白樣品的制備。
2、用NP-40裂解液裂解得到的蛋白樣品，含有較高濃度的去垢劑，不能用Bradford法測定蛋白濃度。建議使用晶彩生物生產的BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度。
原理：
NP40作為非離子型去垢劑可以促進細胞膜的崩解，是一種溫和的細胞組織裂解液。
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產品編號 |
JC-PL004 |
JC-PL005 |
JC-PL006 |
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產品名稱 |
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裂解強度 |
溫和 |
強 |
溫和 |
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對膜蛋白的提取 |
一般 |
很好 |
一般 |
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對胞漿蛋白的提取 |
很好 |
很好 |
很好 |
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對核蛋白的提取 |
較好 |
很好 |
較好 |
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胞漿磷酸化蛋白提取 |
很好 |
很好 |
很好 |
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細胞核轉錄因子提取 |
很好 |
很好 |
很好 |
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主要用途 |
WB, IP, co-IP |
WB, co-IP |
WB, IP ,co-IP |
操作步驟：
對于培養細胞樣品：
1、融解NP-40裂解液，混勻。取適當量的裂解液，在使用前數分鐘內加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM；
2、對于貼壁細胞：去除培養液，用PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下，使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞1-2秒后，細胞就會被裂解；
對于懸浮細胞：離心收集細胞，用手指把細胞用力彈散。按照6孔板每孔細胞加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多，必需分裝成50-100萬細胞/管，然后再裂解；
充分裂解后，10000-14000rpm離心3-5分鐘，取上清，即可進行后續的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。 裂解液用量說明：通常6孔板每孔細胞加入150ul裂解液已經足夠，但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到200ul或250ul。
對于組織樣品：
1、把組織剪切成細小的碎片；
2、融解NP-40裂解液，混勻。取適當量的裂解液，在使用前數分鐘內加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM；
3、按照每20mg組織加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當減少裂解液的用量)；
4、用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解；
5、充分裂解后，10000-14000rpm離心3-5分鐘，取上清，即可進行后續的PAGE、Western和免疫沉淀等操作；
6、如果組織樣品本身非常細小，可以適當剪切后直接加入裂解液裂解，通過強烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續實驗。直接裂解的優點是比較方便，不必使用勻漿器，缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
可以制備樣品數：
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樣品種類 |
樣品來源 |
收獲細胞數 |
RIPA用量 |
可制備樣品數 |
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細胞 |
6孔板 |
2.5*106 |
150-250ul |
400-600 |
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60mm培養板 |
5.2*106 |
300-500ul |
200-300 |
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90mm培養板 |
12.2*106 |
500-1000ul |
100-200 |
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25cm2培養瓶 |
5*106 |
300-500ul |
200-300 |
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75cm2培養瓶 |
2*107 |
1000-2000ul |
50-100 |
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組織 |
20mg組織塊 |
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150-250ul |
400-600 |
